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人胃癌细胞MGC803培养指南 - EVO视讯解析

来源:管世骅 日期:2025-02-27

EVO视讯人胃癌细胞MGC803培养指南

人胃癌细胞MGC803培养指南 - EVO视讯解析

一、细胞培养条件

细胞名称:人胃癌细胞MGC803

生长特性:贴壁生长

冻存条件:无血清冻存液(货号:C7001)

培养体系:1640培养基 + 10% FBS + 1% P

传代方法:首次传代建议按照1:2的比例进行

备注:使用无菌离心管收集培养基以备用。如对比培养效果不佳,建议直接使用EVO视讯的完全培养基。

二、细胞处理方法

收到细胞后,待细胞处于良好状态时,灌满完全培养液并封好瓶口,这是运输细胞的最佳方法。打开细胞瓶前,用75%酒精对整个瓶身进行消毒,然后放置于超净台内,采用严格的无菌操作。接着,将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时,以便恢复细胞状态,再进行后续处理。在显微镜下观察细胞生长情况,并拍摄不同倍数的照片保存(最好分别拍摄40x、100x和200x的照片)。前三天的照片是重要的售后依据,若未提供照片,默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞的汇合度未超过80%,将培养瓶中的完全培养液收集到离心管中,保留5ml完全培养基,放置于37℃、5% CO2的培养箱中进行培养;如果达到了80%以上,则可以进行传代,具体步骤如下:

  1. 弃去培养上清,用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
  2. 向培养瓶中添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液,放入37℃培养箱中消化1-2分钟,观察细胞状态,如细胞基本变圆并脱落,迅速取出操作台,轻轻敲打培养瓶后添加5ml以上的完全培养基以终止消化。
  3. 轻轻吹打使细胞完全脱落后吸出,并将悬液转移至15ml离心管中,以1000 RPM离心5分钟,弃去上清液,加入1-2ml完全培养基重悬。
  4. 按1:2比例分瓶传代(两个T25瓶),补充新的完全培养基至5-8ml每瓶,最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

  1. 当细胞覆盖了培养瓶80%面积时,弃去T25培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次。
  2. 向培养瓶中添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液,轻轻翻转观察,待细胞回缩变圆后,加入5ml完全培养液以终止消化,轻轻吹打细胞使其脱落后,将悬液转移至15ml离心管中,并在1000 RPM下离心5分钟。
  3. 弃去上清,沉淀细胞,再加入1ml的EVO视讯无血清冻存液(货号:C7001),充分混匀后转入冻存管中。
  4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如果后续需要转入液氮罐,需先在-80℃冰箱内存放24小时以上。

c. 细胞复苏

  1. 从液氮中取出冻存管(请佩戴防护面具),快速放入37℃水浴中解冻,直到冻存管中不再有结晶体,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
  2. 将冻存管中的细胞转移到含5ml完全培养基的15ml离心管中,1000 RPM离心5分钟。
  3. 弃去上清,加入5ml完全培养基重悬,并接种到T25培养瓶中,放于37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。
  4. 次日更换新鲜完全培养基以继续培养。

四、注意事项

部分细胞的粘附性较弱,运输过程中可能会发生细胞脱落,这属于正常现象。如果脱落较多,可以将培养瓶内的所有培养液收集至离心管中,1000 RPM离心5分钟,收集上清进行过渡培养。此后,沉淀加入1-2ml胰蛋白酶,轻轻吹打重悬,消化1-2分钟后,加5ml完全培养基以终止反应,再次离心,弃去上清,补充1-2ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代(两个T25),并补充新的完全培养基至5-8ml每瓶,最后放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。

五、售后条款

EVO视讯提供售后保障,关于细胞出现问题时重发的情况如下:

  1. 如因运输造成的细胞丢失、瓶破损或培养液泄漏等问题,将提供重发;
  2. 若细胞在收到后48小时内被确认发生污染,需提供真实实验结果以便核实,符合条件者将重发;
  3. 常温发货的细胞在静置24小时后,干冰发货的细胞在解冻后24小时内,如活性大部分细胞未存活(需提供清晰的细胞状态照片),可申请重发;
  4. 干冰发货的细胞在解冻后24小时内或常温发货细胞在静置4小时后未开封出现污染,符合条件者重发;
  5. 如细胞活性问题,请在收到产品7天内提供真实实验结果,并用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,经核实后重发;
  6. 收到细胞后当天以及第2、3天请拍照如未告知将视为合格,若在4-7天内出现问题,需提供前3天照片及详细操作步骤以供技术人员判断责任并决定是否重发或者按合同价的50%收费重发。

不予重发的情形包括:

  1. 客户自身造成的细胞污染,由此不予重发;
  2. 因客户不当操作导致的细胞状态不佳,不予重发;
  3. EVO视讯推荐的培养体系导致的细胞状态不良,不予重发;
  4. 细胞状态不良未提供培养前三天照片的,不予重发;
  5. 细胞培养过程中有其他处理的,不予重发;
  6. 收到细胞后2天内未及时告知的,不予重发;
  7. 其他具体情况将根据实际情况进行评估处理。
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