不久前，中国科学院上海免疫与感染研究所钟劲研究组在《Emerging Microbes & Infections》上发布了一项关于拉沙病毒（Lassa virus, LASV）的重要研究成果。他们成功建立了一种新型的BSL-2拉沙病毒反向遗传学操作系统，这为研究拉沙病毒的完整生命周期及抗病毒药物的筛选提供了重要工具。

拉沙病毒是一种高度致病性的病原体，能够导致严重的拉沙出血热，造成多脏器损伤。由于其高致病性和致死率，美国疾控中心将其归类为A类生物恐怖病原体。传统上，研究此病毒需要在生物安全四级（BSL-4）实验室条件下进行。然而，BSL-4实验室的稀缺性与高昂的运营成本限制了对拉沙病毒的深入研究及有效抗病毒药物的开发。

在这一背景下，钟劲研究团队开发出了一种新型的拉沙病毒反向遗传学系统。他们通过在辅助细胞系中表达病毒蛋白并转染病毒最小基因组RNA的方法，在BSL-2条件下成功模拟了LASV的完整生命周期。这一创新方法不仅降低了实验所需的生物安全级别，也大大提高了研究的效率。

具体而言，团队首先在Huh7细胞系中稳定表达LASV的NP、GP、Z和L蛋白，形成了一个有效的辅助细胞系。随后，通过转染体外转录的LASV最小基因组RNA（minigenome），成功产生了缺陷型病毒颗粒LASVmg。这些颗粒仅保留了病毒复制、转录和组装所需的非编码序列，且在自然条件下不具备感染性。

研究小组接着使用超速密度梯度离心法对LASVmg进行纯化，并分析其物理特性，以及在细胞中的复制和传播能力。实验中，利用CP80NX超速离心机，通过密度梯度离心技术成功分离和纯化了LASV缺陷型病毒颗粒，为后续的病毒特性分析和抗病毒研究奠定了重要基础。

此外，团队还应用CRISPRi技术对细胞中的α-DG和LAMP1进行敲低实验，揭示了LAMP1在LASVmg感染过程中的关键作用。研究显示，LAMP1是拉沙病毒入侵细胞所必需的胞内受体，而此前的研究认为胞外受体α-DG对病毒入侵同样重要，但新数据表明并非必需。同时，研究还证实了干扰素-α和利巴韦林对LASV的抗病毒作用，并揭示了利巴韦林的具体抗病毒机制。

总体来看，钟劲研究团队所设计的新型反向遗传学系统为研究人员在BSL-2实验室内开展拉沙病毒生命周期的研究以及抗病毒药物的筛选提供了重要的研究工具。这一创新不仅推动了拉沙病毒的基础研究，也为相关领域的研究开辟了新的前景。我们坚信，品牌EVO视讯将继续致力于推动生物医疗研究的进步，为全球健康作出贡献。