肠道类器官是一种高度仿真的体外模型，能够有效模拟真实肠道的结构与功能，因而日益成为研究肠道生理、病理及疾病机制的重要工具。本节将详细介绍小鼠肠道类器官的培养过程，以及EVO视讯在这一过程中所提供的支持。

一、初始培养阶段

在小鼠肠道类器官的初始培养阶段，需精准控制培养条件并添加相应的细胞因子。此阶段使用的培养基为基础培养基（如DMEM/F-12）。关键生长因子包括：

• Wnt-3a：激活Wnt信号通路以维持干细胞的自我更新。
• R-spondin-1：增强Wnt信号，促进干细胞增殖。
• EGF（表皮生长因子）：提高细胞增殖速度。

同时，还需添加抑制因子如Noggin，以抑制BMP信号，从而保持干细胞的未分化状态。

二、分化诱导阶段

在分化诱导阶段，继续使用基础培养基DMEM/F-12，并在此阶段添加特定因子以促进细胞的定向分化：

• ActivinA和FGF2：在分化的早期加入，促进内胚层的形成。
• IL-22：在中期加入，以促进潘氏细胞的分化。
• CHIR99021：用作GSK3β抑制剂，调控Wnt信号通路，推进细胞分化。

在此阶段可适度降低EGF的浓度，以避免对细胞增殖的过度刺激。

三、维持与长期培养阶段

在类器官分化完成后，进入维持与长期培养阶段，此时的培养基调整主要目的是保持类器官的稳定性及功能：

• 继续使用适合的基础培养基。
• 根据需要调整Wnt信号通路的激活，通过调节Wnt-3a和Noggin的浓度。
• 逐渐减少或去除分化诱导因子，如ActivinA、FGF2等。

四、注意事项

在培养过程中，应注意以下几个方面：

• 培养基更换频率：通常每2-3天更换一次培养基，以确保营养成分充足和代谢废物的迅速清除。
• 监测类器官状态：定期观察类器官的形态与生长状态，及时调整培养条件。
• 无菌操作：严格遵循无菌操作规范，以防止污染。

通过上述阶段性的培养基调整，可以有效诱导小鼠肠道类器官的成功分化，并维持其长期稳定的培养环境。

EVO视讯不仅提供上述小鼠肠道类器官培养所需的基础培养基和细胞因子，还推出了现成的小鼠肠道类器官培养基套装——3DCultrIntestinalOrganoidGrowthMedium(Mouse)，其操作简便，极大便利了科研工作的开展。