EVO视讯推出了一款基于探针法荧光定量PCR原理的检测试剂盒，该产品具备以下特点：

产品特点

1. 即开即用：用户仅需提供样品DNA模板。
2. 高灵敏度：引物和其他组分经过优化，确保检测的灵敏度。
3. 阳性对照：本产品提供阳性对照，便于识别假阴性样本。
4. 高特异性：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，避免与其他生物样本DNA发生交叉反应。
5. 多功能性：本产品既可用于定性检测，也可用于定量检测，在定量检测时，线性范围至少达到5个数量级。
6. 经济性：本试剂盒能够支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 研究用途：本产品仅限科研使用。

操作方法

一、DNA提取（样本制备区）

选择适合的方法提取并纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大部分核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

由于阳性对照浓度较高，请在独立区域内进行稀释，避免样品污染。具体步骤如下：

1. 标记6个离心管，编号为7、6、5、4、3、2。
2. 用带芯枪头分别向每个管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10⁸拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品，置于冰上待用。
4. 更换枪头，在6号管中加入5μL 1×10⁷拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10⁶拷贝/μL的标准曲线样品，放冰上待用。
5. 更换枪头，在5号管中加入5μL 1×10⁶拷贝/μL的阳性对照，经过震荡处理，同样获取相应浓度，并放冰上待用。
6. 重复以上步骤直至制备6个稀释度的标准曲线样品，若无需制作标准曲线，可将阳性对照稀释至1×10⁵拷贝/μL即可。

三、试剂配制（试剂准备区）

根据待检样品数量N，准备N+2个qPCR管（包含阴性对照和阳性对照），按照详细说明书准备各PCR管中所需成分，转移至样本准备区。

四、添加模板（模板添加区）

向qPCR管中分别添加2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放置于PCR扩增仪器样品槽中进行扩增，具体的扩增程序请参见详细说明书。

六、结果分析

1. 若制作了标准曲线，需以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴，绘制标准曲线，进而推算待测样品的DNA浓度。
2. 若未制作标准曲线，按照以下标准进行结果判断：阳性对照结果应表现为Ct值<30且具有典型S型曲线；阴性对照结果则为Ct值38或无Ct值；待测样品的Ct值<35显示阳性，Ct值38或无Ct值则表明阴性；若Ct值在35-38范围内，需复检。

运输及保存

本产品应在低温下运输，保存温度为-20℃，保存期限为一年。阳性对照需独立存放，以免污染其他试剂。

选择EVO视讯的试剂盒，确保您的研究检测准确高效。